Low-level laser irradiation promotes proliferation of cryopreserved adipose-derived stem cells / Laser de baixa intensidade promove proliferação de células-tronco derivadas de tecido adiposo criopreservadas

ABSTRACT Objective To evaluate the effect of low-level laser irradiation on proliferation and viability of murine adipose-derived stem cells previously submitted to cryopreservation. Methods Adipose-derived stem cells were isolated from inguinal fat pads of three mice, submitted to cryopreservation in fetal bovine serum with 10% dimethylsulfoxide for 30 days and then thawed and maintained in normal culture conditions. Culture cells were either irradiated or not (control) with an InGaAIP diode laser at zero and 48 hours, using two different energy densities (0.5 and 1.0J/cm2). Cell proliferation was evaluated by trypan blue exclusion method and MTT assay at intervals of zero, 24, 48, and 72 hours after the first laser application. Cell viability and apoptosis of previously cryopreserved cells submitted to laser therapy were evaluated by flow cytometry. Results The Irradiated Groups (0.5 and 1.0J/cm2) showed an increased cell proliferation (p<0.05) when compared to the Control Group, however no significant difference between the two energy densities was observed. Flow cytometry revealed a percentage of viable cells higher than 99% in all groups. Conclusion Low-level laser irradiation has stimulatory effects on the proliferation of adipose-derived stem cells previously submitted to cryopreservation.

RESUMO Objetivo Avaliar o efeito do laser de baixa intensidade na proliferação e na viabilidade de células-tronco derivadas de tecido adiposo murinas previamente submetidas à criopreservação. Métodos Células-tronco derivadas de tecido adiposo foram isoladas da região inguinal de três camundongos, submetidas à criopreservação em soro fetal bovino com 10% de dimetilsulfóxido por 30 dias e, depois, descongeladas e mantidas em condições normais de cultivo. As células cultivadas foram irradiadas ou não (controle) com um laser de diodo InGaAIP nos intervalos de zero e 48 horas, utilizando duas densidades de energia diferentes (0,5 e 1,0J/cm2). A proliferação celular foi avaliada pelo método de exclusão de azul de tripan e ensaio MTT, nos intervalos de zero, 24, 48 e 72 horas após a primeira aplicação do laser. A viabilidade celular e a apoptose das células previamente criopreservadas submetidas à laserterapia foram avaliadas por citometria de fluxo. Resultados Os Grupos Irradiados (0,5 e 1,0J/cm2) apresentaram aumento da proliferação celular (p<0,05) quando comparados ao Grupos Controle, porém não foi observada diferença significativa entre as duas densidades de energia. A citometria de fluxo revelou percentagem de células viáveis superior a 99% em todos os grupos. Conclusão O laser de baixa intensidade tem efeitos estimuladores sobre a proliferação de células-tronco derivadas de tecido adiposo previamente submetidas à criopreservação.

Composition and significance of glycosaminoglycans in the uterus and placenta of mammals

Glycosaminoglycans (GAGs) are heteropolysaccharides in mammalian tissue and consist of repeated disaccharide units with mono-sulfated or non-sulfated monosaccharides. GAGs are important components of the Extracellular Matrix (ECM) with several physiological roles, in the recognition, migration, adhesion, proliferation and differentiation processes. They are also important in angiogenesis, blood homeostasis, immune reactions, follicule development and also in the development of pathologies such as infertility, tumors and metastases. It has been shown that the profile of glycosaminoglycans in the uterine and placental tissues is highly variable throughout the reproductive cycle and during pregnancy. It may be directly related to their physiological or pathological functions in the tissue. The latter has recently triggered special clinical interest. Current review collaborates for a deeper knowledge on the profile and importance of GAGs in uterine and placental tissues throughout the reproductive cycle and pregnancy. It also covers information on the involvement of these molecules in pathological processes.

Influência da composição dos gases durante a modificação da superfície por plasma na adesão de células primárias da polpa dental / Influence of the composition of gases during plasma surface modification on adhesion of primary cells from dental pulp

Amostras de titânio foram nitretadas por plasma usando duas composições gasosas: 80%H2-20%N2 e 20%H2-80%N2 e as propriedades físicas químicas desse tratamento foram estudas, bem como sua resposta biológica quando submetidas à cultura de células primárias da polpa dentária. Análise por difração de raios X indicam a formação de TiN nas duas amostras nitretadas ao contrário da superfície não nitretada que continha apenas a fase Ti-α. Verificaram-se modificações na dureza, topografia e molhabilidade dessas amostras quando comparadas às amostras não nitretadas. A adesão celular nessas amostras indica que o tratamento aumenta seu valor sendo superior para amostras tratadas em maior concentração de hidrogênio.

Samples of titanium were nitrided using plasma and a composition of two gases: 80% H2-20% N2 and 20% H2-80% N2. The influence of these treatments on their physical chemical properties and biological response when subjected to the primary cell culture of dental pulp were studied. Analyses by X-ray diffraction indicate the formation of TiN in both nitrided samples in contrast to the non-nitrided surface samples that contained only the Ti-α phase. Changes in hardness, topography and wettability of these samples compared to non-nitrided samples were found as well. Finally, the analysis of cell’s adhesion in these samples indicate that treatment increases its value being higher for samples treated at higher hydrogen concentration.

Stem cells behavior on titanium surfaces modified by plasma / Análise do comportamento de células-tronco em superfícies de titânio modificadas por plasma

Over the last decade, a considerable development of new technologies to the modification of dental implants has been observed contributing to reduce the healing process and their use in areas with low bone density. Among the new techniques, plasma nitriding has showed excellent results. In this study, a superficial modification of commercial pure titanium (Degree II), by using two different plasma treatments (planar and hollow cathode nitriding) was accomplished aiming at an optimization of the surface for biomedical applications. An evaluation of the chemical composition in all samples was carried out, in addition to a study of their roughness and texture. Then, stem cells were deposited onto these surfaces and a comparison among their properties and their biological behavior was accomplished. The results showed that the nitriding techniques produced significant changes in the superficial texture of the Ti samples. The roughness test presented better results in samples nitrided by hollow cathode technique. Statistically significant differences were found in the cell proliferation of samples nitrided by hollow cathode nitriding when compared to samples without treatment. The used techniques were, therefore, effective and directly influenced the characteristics of the titanium surface and consequently, the stem cell behavior.

Nos últimos anos tem-se observado um grande crescimento em tecnologias para modificação de superfícies de implantes dentais visando reduzir o tempo de espera pela cicatrização, assim como possibilitar seu uso com sucesso em áreas de baixa densidade óssea. Dentre esses métodos de modificação, a nitretação por plasma tem apresentado ótimos resultados. No presente trabalho, estudou-se superfícies de titânio comercialmente puro (Grau II) modificadas através de dois tratamentos por plasma diferentes (nitretação planar e nitretação em cátodo oco), com o objetivo de obter uma otimização da superfície para aplicações biomédicas. Uma avaliação da composição química e um estudo da rugosidade e textura destas amostras foram realizados. Em seguida, depositou-se células-tronco sobre essas superfícies e uma comparação entre as novas propriedades obtidas e a proliferação celular foi feita. Os resultados mostraram que a nitretação por plasma produziu mudanças significativas na textura superficial das amostras de titânio. A rugosidade foi superior nas amostras nitretadas em cátodo oco. Encontrou-se diferença estatisticamente significante na proliferação celular das amostras nitretadas em cátodo oco quando comparadas com as amostras sem tratamento. Essas técnicas de modificação são, portanto, efetivas e possuem influência direta nas características da superfície e no comportamento de células-tronco.

Morphological features and vascularization study of caprine cyclic corpus luteum / Características morfológicas e estudo da vascularização do corpo lúteo cíclico de cabras ao longo do ciclo estral

Corpus luteum is a temporary endocrine gland that regulates either the estrous cycle and pregnancy. It presents extreme dependency on the adequate blood supply. This work aims to evaluate goat corpus luteum (CL) vascular density (VD) over the estrous cycle. For that purpose, 20 females were submitted to estrus synchronization/ovulation treatment using a medroxyprogesterone intra-vaginal sponge as well as intramuscular (IM) application of cloprostenol and equine chorionic gonadotrophine (eCG). After sponge removal, estrus was identified at about 72hs. Once treatment was over, female goats were then subdivided into 4 groups (n=5 each) and slaughtered on days 2, 12, 16 and 22 after ovulation (p.o). Ovaries were collected, withdrawn and weighted. CL and ovaries had size and area recorded. Blood samples were collected and the plasma progesterone (P4) was measured through RIA commercial kits. The VD was 24.42±6.66, 36.26±5.61, 8.59±2.2 and 3.97±1.12 vessels/mm² for days 2, 12, 16 and 22 p.o, respectively. Progesterone plasma concentrations were 0.49±0.08, 2.63±0.66, 0.61±0.14 and 0.22±0.04ng/ml for days 2, 12, 16 e 22 p.o, respectively. Studied parameters were affected by the estrous cycle phase. Values greater than 12 p.o were observed. In the present work we observed that ovulation occurred predominantly in the right ovary (70 percent of the animals), which in turn presented bigger measures than the contra lateral one. There is a meaningful relationship between the weight and size of the ovary and these of CL (r=0.87, r=0.70, respectively, p<0.05). It is possible to conclude that morphology of goat's ovaries and plasma progesterone concentration changed according to estrous cycle stages. We propose these parameters can be used as indicators of CL functional activity.

O corpo lúteo é uma glândula endócrina temporária que regula tanto o ciclo estral quanto a prenhez, apresentando extrema dependência de aporte sanguíneo adequado. Objetivaram-se avaliar mudanças morfométricas dos ovários e densidade vascular (DV) dos corpos lúteos (CL) de cabras ao longo do ciclo estral (AOLC). Vinte animais foram submetidos ao tratamento para indução/sincronização do estro, usando esponjas intravaginais commedroxiprogesterona, associadas a aplicações intramusculares de cloprostenol e gonadotrofina coriônica eqüina. Após remoção das esponjas, o estro foi identificado em aproximadamente de 72h. Concluído o tratamento, as cabras foram subdivididas em 4 grupos (n=5 cada) para abate nos dias 2, 12, 16 e 22 após ovulação (p.o.). Posteriormente, foram retirados os ovários e realizadas as mensurações de peso, tamanho e área do órgão e dos CL. Amostras de sangue foram coletadas e a progesterona sérica (P4) mensurada utilizando-se RIA convencional. A DV média dos CL AOLC foi 24,42±6,66; 36,26±5,61; 8,59±2,2 e 3,97±1,12 vasos/mm2 para os dias 2, 12, 16 e 22 p.o., respectivamente. A concentração média de P4 foi de 0,49±0,08; 2,63±0,66; 0,61±0,14 e 0,22±0,04ng/ml para os dias 2, 12, 16 e 22 p.o., respectivamente. Os parâmetros em estudo também se mostraram afetados pela fase do ciclo estral, sendo observados os maiores (p < 0,05) valores no dia 12 p.o. Neste experimento, a ovulação ocorreu predominantemente no ovário direito (70 por cento dos animais), o qual apresentou medidas maiores que o contralateral. Observou-se ainda alta correlação significativa entre o peso do ovário e o do CL (r=0,87; p<0,05) e entre o tamanho destes órgãos (r=0,70; p<0,05). Conclui-se que, a morfologia dos ovários de cabras e a concentração sérica de progesterona variam em função da fase do ciclo estral e podem ser utilizadas como parâmetro na avaliação funcional do órgão.

Caracterizaçäo de uma fucana da alga Spatoglossum schröederi e análise de suas atividades anti-adesiva, antimigratória, antiproliferativa e antitrombótica / Characterization the fucan of patoglossum schröederi alga and analusis of this activity anti-aahesive, antimigratory, antiprolephetative and antitrombotic

Fucana é uma denominaçao utilizada para polissacarídeos sulfatados, lineares ou nao, que tem como característica estrutural mais marcante a presença de L-fucose sulfatada. A alga Spatoglossum schroederi produz três fucanas, denominadas de fucanas A, B e C. A Fuc B, com massa molecular de 21,5 kDa, constituída de fucose: xilose: galactose: sulfato (1: 0,5: 2: 2) e traços de ácido urônico, foi extraída da alga por hidrólise enzimática e purificada por precipitaçao diferencial com acetona e cromatografias de troca iônica e gel filtraçao. As análise químicas, estudos de metilaçao e espectroscopia de RMN de 113 e 213, indicaram as principais características estruturais da Fuc B. Ela é formada por um estrutura central de (3-D-1-galactose-3504-4, com aproximadamente 50 por cento dessas galactoses sendo substituídas em C2 por cadeia laterais formadas por a-L-1-fucose-4 ou a-L-fucose(1 -->4) (3D-xilose-, estando as (coses sulfatadas em C3, apresentando essas cadeias monômeros de xilose ou galactose na posiçao de açúcar terminal nao redutor. A Fuc B nao apresentou atividades anticoagulante e hemorrágica. Todavia, testes "in vivo" indicaram que ela possui atividade antitrombótica no estudo de ligadura de veia ficava, dependente do tempo, da dose e do seus grupamentos sulfato. Verificou-se, também, que a Fuc B foi duas vezes mais potente do que a heparina ou a fucana A (Fuc A) em estimular a síntese do heparam sulfato (HS) pelas células endoteliais de aorta de coelho. Esse efeito foi dose dependente e foi abolido com a dessulfataçao da Fuc B. Todavia, tanto Fuc B como Fuc A nao apresentaram atividades citotóxicas como citostáticas frente as células endoteliais. Esses dados levam a proposta de que a capacidade de estimular a síntese de HS pelas células endoteliais é que é responsável pela atividade antitrombótica da Fuc B...(au)